Методические аспекты определения тестостерона

Общий тестостерон

Общий тестостерон можно измерить в сыво­ротке прямыми методами иммунохимии или пос­ле экстракции с органическими растворителями с или без последующего хроматографического разделения. Коммерческие РИА-наборы для пря­мого измерения тестостерона не требуют экстрак­ции, в качестве радиоактивной метки использу­ют ¹²⁵I, технически легки в исполнении и облада­ют достаточными точностными характеристика­ми (правильность и воспроизводимость) для боль­шинства клинических задач. Однако в случае низ­кого уровня SHBG результаты РИА-определения тестостерона могут быть завышенными, и, наобо­рот, при высоком уровне SHBG определение те­стостерона занижено. Этот результат возникает из-за разной концентрации SHBG в используе­мых для анализа стандартах и в пробе и разного связывания немеченного тестостерона с SHBG и антителами сыворотки, в которой меченный ¹²⁵I-тестостерон первично связан с антителами. Прямые наборы так же, как правило, завыша­ют результаты при низкой концентрации тес­тостерона.

Более правильные результаты при низкой концентрации тестостерона и выраженных ко­лебаниях SHBG дают методики с экстракцией гормона органическими растворителями и хроматографическим их разделением. Однако эти методы дорогостоящие и трудоемкие для вы­полнения в клинико-диагностических лабора­ториях.

В настоящее время для клинического исполь­зования разработаны полностью автоматизиро­ванные двухэтапные методы иммунохимического определения половых гормонов. Это хемилюминесцентный иммуноанализ, использующий нерадиоактивную метку и характеризующийся очень быстрым выполнением исследования за счет короткого времени инкубации. Воспроизводимость и правильность хемилюминесцентного определения тестостерона в большинстве случаев не уступают РИА, однако при низких концен­трациях тестостерона результат может быть еще больше завышен. Липемия также может быть причиной ложных результатов.

Свободный тестостерон

Свободный тестостерон определяется как процент общего тестостерона на основании про­ведения равновесного диализа. В этом случае из­меряется радиоактивность ³Н-меченного тестос­терона, добавленного к пробе, после диффузии его через полупроницаемую диализную мембра­ну. Свободная фракция составляет 1-4% общего тестостерона, что соответствует 4-20 нг/100 мл сыворотки. Этот многоэтапный анализ потенци­ально может иметь несколько погрешностей, выз­ванных нарушением температуры, неправильным дозированием и низким уровнем сигнала. Иног­да 3Н-меченный тестостерон измеряют прямо в диализате, но в этом случае необходимо исполь­зовать очень чувствительную аппаратуру. Центрифужная ультрафильтрация - разновидность метода равновесного диализа, в котором исполь­зуется ультрацентрифугирование для разделения через полупроницаемую мембрану свободного тестостерона от связанного.

В настоящее время разработаны и широко используются в диагностических целях наборы для определения свободного тестостерона методом РИА, в которых прямо измеряют свободный ¹²⁵I-меченный тестостерон. В этих тестах приме­няется антисыворотка непосредственно против тестостерона, а не против SHBG, тест высокопро­изводительный, одноэтапный, без экстракции. Несмотря на то что этот метод хорошо коррелирует с методом равновесного диализа, тем не менее получаемые результаты свободного тестостерона занижены примерно на 25%. Кроме того, при измерении этим способом свободный тестостерон не снижается при увеличении SHBG, т. е. свобод­ный тестостерон практически воспроизводит те же изменения, что и общий тестостерон, поэтому при таком способе измерения свободного тестос­терона не выявляется дополнительной клиничес­кой информации по сравнению с определением общего тестостерона.

Расчетный свободный тестостерон. Одним из подходов для коррекции при вариантах с раз­ной концентрацией SHBG является расчет сво­бодного тестостерона из уровня общего тесто­стерона и SHBG с использованием константы связывания тестостерона для SHBG и альбуми­на (Sodergard et al. // J. Sterjid Biochem 1982; 16: 810). Иногда вычисляют индекс свободного тес­тостерона как отношение общего тестостерона к SHBG, выраженному в нмоль/л. Несмотря на то что этот индекс легко вычисляется, однако его можно использовать только у мужчин, так как у женщин SHBG является транспортным белком для эстрогенов.

Биодоступный тестостерон

Биодоступный тестостерон, или тестостерон, не связанный с SHBG, - это в основном тестосте­рон, соединенный с альбумином, который харак­теризуется низкой аффинностью. Согласно пред­ставлениям о биодоступности тестостерон из ком­плекса с альбумином легко диссоциирует в орга­нах-мишенях и тем самым доступен для осуще­ствления биологических эффектов. Для опреде­ления биодоступного тестостерона используется метод преципитации ³Н-тестостерона, связанно­го с SHBG, сульфатом аммония. Тестостерон, не связанный с SHBG (биодоступный тестостерон), рассчитывается путем вычитания из общего тес­тостерона количества тестостерона, оставшегося в супернатанте после осаждения преципитатов, сформировавшихся на сульфате аммония. Биодоступный тестостерон тесно коррелирует в широ­ком диапазоне концентраций со свободным тес­тостероном (рис. 23). Этот факт можно рассмат­ривать как доказательство, что данный показа­тель дает возможность получить достаточно по­лезную клиническую информацию.

Эстрогены

Значение эстрогенов в мужском организме изучено недостаточно. Известно, что около 70% эстрогенов образуется преимущественно в пече­ни и жировой ткани в результате периферичес­кой ароматизации тестостерона в эстрадиол и андростендиона в эстрон, а остальные 30% син­тезируются яичками и надпочечниками. Поэто­му в сыворотке мужчин циркулируют как андрогены, так и эстрогены. В норме концентрация об­щего эстрадиола <50 пг/мл, а общего эстрона -<60 пг/мл. Концентрация сывороточного эстрадиола у мужчин практически постоянна в тече­ние суток и не меняется с возрастом. Эстрогены в плазме связаны в основном с альбумином, срод­ство эстрадиола с SHBG составляет примерно 10% от сродства тестостерона с SHBG, поэтому изменения SHBG мало влияют на содержание эс­трогенов в плазме.

Ароматизация тестостерона до эстрогенов играет важную роль в развитии предстательной железы. Концентрация эстрогенов в стромальной ткани предстательной железы повышается при ее гиперплазии. Определение в сыворотке эс­трогенов может быть полезным для клинической оценки мужского гипогонадизма и гинекомас­тии. В табл. 2 представлены заболевания, кото­рые могут сопровождаться повышением эстро­генов в сыворотке, наиболее частой причиной этого является ожирение. Похудание сопровож­дается снижением концентрации эстрогенов.

Заболевания, которые могут сопровождаться повышением эстрогенов в сыворотке мужчин

Опухоли

  Опухоли яичек из клеток Лейдига и клеток Сертоли

  Аденома и карцинома надпочечников

  Хорионкарцинома

  Гепатома

Первичная тестикулярная недостаточность

Алкогольный цирроз печени

Гипертиреоз

Ожирение

Наследственная избыточная активность ароматаз

Неадекватное использование лекарственных препаратов

  Антиандрогенов

  Антиэстрогенов

Для определения эстрогенов в сыворотке вы­пускаются тест-наборы, но они предназначены в первую очередь для использования у женщин, уровень эстрогенов у которых значительно выше, чем у мужчин. Поэтому эти тест-наборы дают от­носительно высокую погрешность при определе­нии концентрации эстрогенов у мужчин, в связи с чем рекомендуется при низких концентрациях эстрогенов делать предварительную экстракцию эстрогенов органическими растворителями, в не­которых случаях даже хроматографическое раз­деление интерферирующих стероидов, а затем уже иммуноанализ.