Методические аспекты определения тестостерона
Общий тестостерон
Общий тестостерон можно измерить в сыворотке прямыми методами иммунохимии или после экстракции с органическими растворителями с или без последующего хроматографического разделения. Коммерческие РИА-наборы для прямого измерения тестостерона не требуют экстракции, в качестве радиоактивной метки используют 125I, технически легки в исполнении и обладают достаточными точностными характеристиками (правильность и воспроизводимость) для большинства клинических задач. Однако в случае низкого уровня SHBG результаты РИА-определения тестостерона могут быть завышенными, и, наоборот, при высоком уровне SHBG определение тестостерона занижено. Этот результат возникает из-за разной концентрации SHBG в используемых для анализа стандартах и в пробе и разного связывания немеченного тестостерона с SHBG и антителами сыворотки, в которой меченный 125I-тестостерон первично связан с антителами. Прямые наборы так же, как правило, завышают результаты при низкой концентрации тестостерона.
Более правильные результаты при низкой концентрации тестостерона и выраженных колебаниях SHBG дают методики с экстракцией гормона органическими растворителями и хроматографическим их разделением. Однако эти методы дорогостоящие и трудоемкие для выполнения в клинико-диагностических лабораториях.
В настоящее время для клинического использования разработаны полностью автоматизированные двухэтапные методы иммунохимического определения половых гормонов. Это хемилюминесцентный иммуноанализ, использующий нерадиоактивную метку и характеризующийся очень быстрым выполнением исследования за счет короткого времени инкубации. Воспроизводимость и правильность хемилюминесцентного определения тестостерона в большинстве случаев не уступают РИА, однако при низких концентрациях тестостерона результат может быть еще больше завышен. Липемия также может быть причиной ложных результатов.
Свободный тестостерон
Свободный тестостерон определяется как процент общего тестостерона на основании проведения равновесного диализа. В этом случае измеряется радиоактивность 3Н-меченного тестостерона, добавленного к пробе, после диффузии его через полупроницаемую диализную мембрану. Свободная фракция составляет 1-4% общего тестостерона, что соответствует 4-20 нг/100 мл сыворотки. Этот многоэтапный анализ потенциально может иметь несколько погрешностей, вызванных нарушением температуры, неправильным дозированием и низким уровнем сигнала. Иногда 3Н-меченный тестостерон измеряют прямо в диализате, но в этом случае необходимо использовать очень чувствительную аппаратуру. Центрифужная ультрафильтрация - разновидность метода равновесного диализа, в котором используется ультрацентрифугирование для разделения через полупроницаемую мембрану свободного тестостерона от связанного.
В настоящее время разработаны и широко используются в диагностических целях наборы для определения свободного тестостерона методом РИА, в которых прямо измеряют свободный 125I-меченный тестостерон. В этих тестах применяется антисыворотка непосредственно против тестостерона, а не против SHBG, тест высокопроизводительный, одноэтапный, без экстракции. Несмотря на то что этот метод хорошо коррелирует с методом равновесного диализа, тем не менее получаемые результаты свободного тестостерона занижены примерно на 25%. Кроме того, при измерении этим способом свободный тестостерон не снижается при увеличении SHBG, т. е. свободный тестостерон практически воспроизводит те же изменения, что и общий тестостерон, поэтому при таком способе измерения свободного тестостерона не выявляется дополнительной клинической информации по сравнению с определением общего тестостерона.
Расчетный свободный тестостерон. Одним из подходов для коррекции при вариантах с разной концентрацией SHBG является расчет свободного тестостерона из уровня общего тестостерона и SHBG с использованием константы связывания тестостерона для SHBG и альбумина (Sodergard et al. // J. Sterjid Biochem 1982; 16: 810). Иногда вычисляют индекс свободного тестостерона как отношение общего тестостерона к SHBG, выраженному в нмоль/л. Несмотря на то что этот индекс легко вычисляется, однако его можно использовать только у мужчин, так как у женщин SHBG является транспортным белком для эстрогенов.
Биодоступный тестостерон
Биодоступный тестостерон, или тестостерон, не связанный с SHBG, - это в основном тестостерон, соединенный с альбумином, который характеризуется низкой аффинностью. Согласно представлениям о биодоступности тестостерон из комплекса с альбумином легко диссоциирует в органах-мишенях и тем самым доступен для осуществления биологических эффектов. Для определения биодоступного тестостерона используется метод преципитации 3Н-тестостерона, связанного с SHBG, сульфатом аммония. Тестостерон, не связанный с SHBG (биодоступный тестостерон), рассчитывается путем вычитания из общего тестостерона количества тестостерона, оставшегося в супернатанте после осаждения преципитатов, сформировавшихся на сульфате аммония. Биодоступный тестостерон тесно коррелирует в широком диапазоне концентраций со свободным тестостероном (рис. 23). Этот факт можно рассматривать как доказательство, что данный показатель дает возможность получить достаточно полезную клиническую информацию.
Эстрогены
Значение эстрогенов в мужском организме изучено недостаточно. Известно, что около 70% эстрогенов образуется преимущественно в печени и жировой ткани в результате периферической ароматизации тестостерона в эстрадиол и андростендиона в эстрон, а остальные 30% синтезируются яичками и надпочечниками. Поэтому в сыворотке мужчин циркулируют как андрогены, так и эстрогены. В норме концентрация общего эстрадиола <50 пг/мл, а общего эстрона -<60 пг/мл. Концентрация сывороточного эстрадиола у мужчин практически постоянна в течение суток и не меняется с возрастом. Эстрогены в плазме связаны в основном с альбумином, сродство эстрадиола с SHBG составляет примерно 10% от сродства тестостерона с SHBG, поэтому изменения SHBG мало влияют на содержание эстрогенов в плазме.
Ароматизация тестостерона до эстрогенов играет важную роль в развитии предстательной железы. Концентрация эстрогенов в стромальной ткани предстательной железы повышается при ее гиперплазии. Определение в сыворотке эстрогенов может быть полезным для клинической оценки мужского гипогонадизма и гинекомастии. В табл. 2 представлены заболевания, которые могут сопровождаться повышением эстрогенов в сыворотке, наиболее частой причиной этого является ожирение. Похудание сопровождается снижением концентрации эстрогенов.
Заболевания, которые могут сопровождаться повышением эстрогенов в сыворотке мужчин
Опухоли
Опухоли яичек из клеток Лейдига и клеток Сертоли
Аденома и карцинома надпочечников
Хорионкарцинома
Гепатома
Первичная тестикулярная недостаточность
Алкогольный цирроз печени
Гипертиреоз
Ожирение
Наследственная избыточная активность ароматаз
Неадекватное использование лекарственных препаратов
Антиандрогенов
Антиэстрогенов
Для определения эстрогенов в сыворотке выпускаются тест-наборы, но они предназначены в первую очередь для использования у женщин, уровень эстрогенов у которых значительно выше, чем у мужчин. Поэтому эти тест-наборы дают относительно высокую погрешность при определении концентрации эстрогенов у мужчин, в связи с чем рекомендуется при низких концентрациях эстрогенов делать предварительную экстракцию эстрогенов органическими растворителями, в некоторых случаях даже хроматографическое разделение интерферирующих стероидов, а затем уже иммуноанализ.
|